紫三叶(Trifolium repens 'Purpurascens Quadrifolium')为豆科车轴草属多年生常绿草本,本试验大大提高紫三叶繁殖速度和苗的整齐度,并提高性状稳定性,为实现育苗的工厂化生产提供参考。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
取萌发的幼芽,去除外面包裹的叶片后,用自来水冲洗1-3小时后于超净工作台上,用75%酒精浸泡30秒,再用0.1%的升汞溶液浸泡10分钟,最后用无菌水冲洗5次,无菌纸吸干表面水分后备用。
1.2 芽诱导培养
将消毒完的外植体切成0.5-2.0厘米长的带腋芽的茎段接种到芽诱导培养基MS + 6-BA 3.0mg/L + NAA 0.3mg/L中,培养1-3周,小芽部位开始膨大,出现绿色突起,2-3周后可见芽分生组织,再培养1-2个月,小芽可以长到2-3厘米,将其切下转接到增殖培养基MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 0.2mg/L上进行丛生芽增殖诱导。
1.3 壮苗培养
将经增殖培养的丛生芽中生长良好的直接转到生根培养,将其中矮小的切成小丛的,转接到壮苗培养基MS + 6-BA 1.0mg/L + NAA 0.1mg/L上经过15-30天的培养,不定芽生长迅速,可长至1.5-3厘米。
1.4 生根培养
选择伸长至1.5-3厘米的芽苗切取完整单株,转接到生根培养基MS + NAA 0.1mg/L上培养5-15天左右,幼苗基部分化出白色的根原基,15-30天后克已长至2-3厘米,根系粗壮,须根众多,生根率达90-100%
1.5 培养条件
以上培养基均含琼脂粉7g/L,蔗糖30g/L,pH值5.5-6.0,温度25±2℃,光照强度1500-2500lx,12小时/天。
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