羌活(Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang)伞形科伞形科、羌活属植物,多年生草本植物,为解决羌活产业前端的种苗问题,本实验采用生物工程技术,建立组培快繁技术体系,以期缓解实际生产中羌活种苗的供求问题。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
取生长健壮,无病虫害的羌活植株,先用自来水冲洗20分钟左右,再用洗衣粉浸泡30分钟,采用流水冲洗干净,用吸水纸吸去外植体表面多余的水分,选取芽鞘作为外植体,在超净台内用75%的酒精溶液浸泡30秒,用无菌水冲洗1次,再用0.1%的升汞溶液浸泡8分钟,用无菌水冲洗5 次,在无菌纸上吸干备用。
1.2 愈伤组织诱导
将处理好的芽鞘切成1-2厘米长,接种到愈伤组织诱导培养基MS + 2,4-D 1.5mg/L + KT 0.2mg/L + NAA 0.4mg/L中,培养30天左右,诱导率达73.3%。
1.3 不定芽诱导
选取浅黄色致密的愈伤组织接种刀不定芽诱导培养基MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 1.0mg/L上,15天左右芽鞘愈伤组织由浅黄色转为浅黄绿色,20天后开始出现绿色的芽点;30天后,绿色芽点长大,并形成不定芽,形成不定芽的数量随培养时间的延长而增加。
1.4 生根培养
当羌活不定芽苗长到2-3厘米左右时,将其切割下来转接到生根培养基1/2MS + NAA 0.3mg/L + IBA 0.3mg/L上,培养20天左右,底部长出白色的根,生根数为5-8个,继续培养30天左右,根系颜色转为淡黄色,生根数达到10-12个,生根率达81%。
1.5 培养条件
以上培养基均含琼脂7g/L,蔗糖30g/L(生根培养基为20g/L),VC浓度100mg/L,pH值5.8-6.0,温度25±2℃,光照强度1000lx,12小时/天。
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