大黄(Rheum palmatum L.)是蓼科大黄属的多年生草本植物,本试验用组织培养技术为大黄的快繁快育和种质改良提供技术参考。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
选取发育正常的、无病害的、饱满的大黄休眠种子,无菌水冲洗3次,在75%酒精中浸泡30秒,2%次氯酸钠溶液中浸泡8分钟,无菌水冲洗3次,用灭菌滤纸吸干表面水分,备用。
1.2 种子萌发
在超净工作台上,将处理后的种子胚芽朝下后插入种子萌发培养基MS + 6-BA 1.0mg/L + NAA 0.1mg/L中,培养到第5天时,大黄种子长出胚,呈白色,长度约5毫米,长势较好;培养到第10天时,生长出两片子叶,呈能绿色,长势依然旺盛,子叶长约1.5厘米,宽约8毫米;培养到第20天时,叶片逐渐茂盛,数量多为4-6片,呈深绿色,生长出根茎及根毛;培养到第30天时,叶片不断生长,呈深绿色,冒出嫩绿色新芽,根毛数量不断增多。
1.3 愈伤组织诱导
种子萌发后,切取下胚轴转接到愈伤组织诱导培养基MS + 6-BA 1.5mg/L + NAA 1.5mg/L上,培养15天:愈伤组织呈淡绿色,晶莹剔透,较紧密,诱导率达68.2%,将发育较好的愈伤组织转接到增殖培养基MS + 6-BA 0.5mg/L + KT 1.0mg/L + NAA 1.5mg/L中,可获得大量愈伤组织。
1.4 芽分化培养
将长势优良的愈伤组织接种到芽分化培养基MS + 6-BA 1.5mg/L + NAA 0.5mg/L上,培养35-45天左右,长势旺盛,不定芽数量多,分化率85%。
1.5 生根培养
将长势优良的不定芽剪切成单株,每株2-3片叶子,转接到生根培养基MS + IBA 0.1mg/L上,培养35天左右,可长出根系。
1.6 培养条件
以上培养基均添加蔗糖30g/L(生根培养基15g/L),7g/L琼脂,pH值5.8,温度25±1℃,光照强度3000lx(生根阶段为2000lx),12小时/天。
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