薰衣草(Lavandula angustifolia cv. Munstead)是唇形科薰衣草属多年生半灌木,本试验通过组培技术研究,以期提高薰衣草的繁殖效率,促进薰衣草规模化快繁和遗传转化体系的建立。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
剪取薰衣草的叶片作为外植体,将叶片先用75%酒精表面灭菌25秒,再用0.1%升汞溶液浸泡3分钟,然后用无菌水冲洗4-5次。把叶片切成0.5平放里面大小的小片状,待接种。
1.2 愈伤组织诱导
将切好的叶片接种到诱导培养基MS + 6-BA 0.5mg/L + 2,4-D 0.1mg/L上,培养2-4天,叶片发生卷曲;9-12天叶片出现突起,少数叶片在切口处出现愈伤组织;接种13-16天,叶片切口处愈伤组织呈凹瘤状,叶缘及叶尖都有愈伤组织;20-25天叶片全部出现愈伤组织,诱导率达100%。
挑取黄色、松散的愈伤组织转接到MS + 6-BA 0.5mg/L + 2,4-D 0.05mg/L上进行继代培养,继代周期为25-30天左右。
1.3 芽分化培养
将新鲜、松散的愈伤组织转接到分化培养基MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 0.5mg/L + IBA 0.15mg/L + 硝酸亚铈 10.0mg/L + 钼酸钠 0.5mg/L上,培养5-8天后膨大,15-20天后可见许多密致小突起,突起逐渐长大形成丛生芽,培养30天左右,芽分化率为73.3%。将分化出来的芽苗转接到MS + 6-BA 0.5mg/L + NAA 2.0mg/L进行继代培养,15-20天左右,可获得大量组培苗。
1.4 生根培养
选取生长健壮,苗高大于3厘米的小苗,转入生根培养基MS + IAA 0.5mg/L + 6-BA 0.1mg/L + 活性炭 1.0g/L中培养10天后,可见白色根点长出,30天都有较长的根长出,生根率100%。
1.5 培养条件
以上培养基均添加30g/L蔗糖,7g/L琼脂,pH值5.8,温度25±1℃,光照强度2500-3500lx,12小时/天。
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