寒兰（Cymbidium Kanran Makino），是兰科兰属中的地生兰，属多年生常绿草本植物，寒兰的传统繁殖方式是分株繁殖，由于寒兰的新假鳞茎每年只能产生 1-2 个新芽，分株繁殖系数低、速度慢，无法满足大量种植生产的需求，制约了寒兰的产业化发展。此外长期无性分株繁殖，带病毒植株逐年增多，也导致品种退化，影响寒兰的生长和观赏价值。
本试验以寒兰的茎尖为外植体，建立高效稳定的寒兰组织培养技术体系，为今后实现寒兰工厂化和商业化生产奠定技术基础。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
切取高为2-3厘米左右的初生芽(叶片未展开)，去除根和2-3片包叶，用水冲洗干净后，转入超净工作台，用75%酒精浸泡30秒，无菌水冲洗2-3次，用0.1%的升汞溶液消毒10分钟，用无菌水冲洗4-5次，剥去外面叶片直至露出茎尖生长点，切取0.5厘米长的茎尖，待接种。
1.2 原球茎诱导
将切取的茎尖接种到诱导培养基MS + 6-BA 1.0mg/L + NAA 3mg/L + 活性炭 2.0g/L上，在暗环境培养90天后，茎尖外植体开始启动，产生黄白色的球状突起，随着培养时间的加长，逐渐转变成黄绿色的原球茎。培养120天后，诱导率为42.22%，诱导出原球茎后，转入2000lux光下进行继代培养，形成根状茎。
1.3 继代增殖培养
将根状茎切成1.5厘米长无分支的小段，转接到根状茎增殖培养基1/2MS + 6-BA 0.5mg/L + NAA 1.0mg/L中培养60天左右，根状茎增殖系数可达6.10。
1.4 根状茎分化培养
将增殖后的根状茎转接到分化培养基1/2MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 1.0mg/L + 蛋白胨 2mg/L + 活性炭 2.0g/L上，培养50天后，根状茎分化率为78.33%。
1.4 生根培养
当根状茎上的芽长至2-3厘米长时，将芽切下，转入生根培养基1/2MS + IBA 1.0mg/L + 6-BA 0.3mg/L + NAA 0.5mg/L + 活性炭 2.0g/L中培养45天后，生根率达95%，生根数达5.42。
1.5 培养条件
以上培养基均添加30g/L蔗糖，5g/L琼脂，pH值5.8，温度25±1℃，光照强度2000lx，10-12小时/天。
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