茉莉Jasminum sambac(L.)Aiton是木犀科茉莉属常绿小灌木,茉莉的离体微繁技术有利于在短时间内获得基因型一致的优质苗木加快优良品种的育苗进程,更可为进一步建立高效遗传转化体系、培育转基因新品种奠定基础。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
5月中旬选取新生的半木质化枝条剪取幼嫩带芽茎段,流水冲洗2小时,剪去展开叶片70%乙醇浸泡消毒1分钟后转入0.1%升汞溶液中灭菌8分钟,用无菌水冲洗5-6次,切成1.0厘米左右的具节茎段备用。
1.2 初代培养
将处理好的外植体接种到培养基WPM + 6-BA 2.0mg/L + IBA 0.1mg/L上,10天左右腋芽膨大、叶片展开,20天后腋芽处抽出新芽,新芽大约2-4厘米,外植体基本无愈伤组织产生。
1.3 继代增殖培养
将3-4厘米的萌发腋芽,剪切成1厘米左右具节茎段,转接到增殖培养基WPM + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.2mg/L中培养30天左右,平均芽数为1.32、平均芽长为4.89厘米、生长量为6.46厘米、增殖系数达到5.31,且试管苗健壮,叶片平展。
1.4 生根培养
将增殖培养的组培苗剪切成1-1.5厘米的茎段转入生根培养基1/2WPM + NAA 1.0mg/L中培养7天后,然后转入不含任何激素的1/2WPM培养基上,2-3天基本即有数条白色细根形成,生长迅速,7-10天后根系长至2-3厘米。
1.5 培养条件
以上培养基均添加30g/L蔗糖,6.5g/L琼脂,pH值5.6,温度30±2℃(增殖阶段35℃左右),光照强度6000lx,16小时/天。
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