何首乌(Fallopia multiflora(Thunb.) Harald.)又名首乌、地精、赤敛、小独根、野苗、交茎、交藤、夜合、多花寥等,为蓼科多年生草本植物,是常用传统中药。无论是在快繁、良种选育,还是在其药理研究中,运用组织培养的方法都必将能做到事半功倍,为此有必要进行一系列的试验以探求用组织培养的方法快速繁殖何首乌的成套技术。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
取何首乌带侧芽茎段,用洗衣粉溶液浸泡并用柔软毛刷轻轻涮洗表面约5分钟,然后用自来水冲洗干净,再在超净工作台内进行无菌操作,用0.1%氯化汞浸泡 8分钟,无菌水冲洗5次,最后将其切成1厘米长的带侧芽小段,待接种。
1.2 初代培养
将处理好的外植体接种在诱导培养基MS + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.1mg/L上,培养10天后,腋芽开始萌动生长,逐渐伸长,到15天左右,伸长的腋芽再在其节处抽生出芽,整个培养物在培养 35-40天后形成丛生芽。
1.3 继代增殖培养
把初代培养得到的不定芽条切成1厘米长的带侧芽小段,转接到增殖培养基MS + 6-BA 1.5mg/L + IBA 0.1mg/L,7天以后腋芽明显膨大,2周以后腋芽伸长到0.5-1厘米。到20天时,抽生的芽增高较明显,平均增高0.71厘米。到30天时抽生的芽条平均增长1.3厘米,刚抽生芽及嫩叶略带紫红色,但叶伸展长大后逐渐变绿。
1.4 生根培养
将芽丛切割成单芽转接到生根培养基1/2MS + NAA 0.5mg/L上,4-5天后,芽基部开始出现一层白色半透明的愈伤组织。随后,基部愈伤组织慢慢膨大,10-12天时,开始有少量根须出现,至20天时,无菌苗生根率高,培养苗生长状况良好,没有死亡现象发生。
1.5 培养条件
以上培养基均添加3%蔗糖和0.7%琼脂粉,pH值5.8,温度25±2℃,光照强度1500lx,12小时/天。
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