人参(Panax ginseng)系五加科人参属多年生草本植物,本研究以其花药作为外植体进行了培养,成功地建立了人参的繁殖体系。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
取花粉发育时期为单核中期的花蕾,在70%酒精中浸泡20秒后,再用0.1%升汞溶液灭菌10分钟,无菌水冲洗4-5次。
1.2 初代培养
无菌调节下剥取花药,接种在诱导培养基MS + 2,4-D 1.5mg/L + IAA 1.0mg/L + 6-BA 0.5mg/L + 6%蔗糖 + 0.7%琼脂上,在25-28℃,暗培养20天左右,开始出现肉眼可见的愈伤组织。
1.3 继代增殖培养
当愈伤组织形成25-30天,大约2毫米左右时,转接到分化培养基MS + KT 2.5mg/L + IBA 0.5mg L + GA3 2.0mg/瓶 + 0.1%水解乳蛋白 + 3%蔗糖 + 0.7%琼脂粉上,在22-26℃,光照10小时/天,40天左右可见分化物产生,分化物初为乳白色或淡绿色小圆点,形成芽孢壮的芽原基。
1.4 生根培养
分离不定芽,转移到生根培养基MS + NAA 1.0mg/L + GA3 0.5mg/L + 6-BA 0.2mg/L + 0.2%活性炭 + 3%蔗糖 + 0.7%琼脂粉 + 蛋白胨 500mg/L上,在20-28℃,光照16小时/天条件下培养,根系生长较快,30天后平均根长1厘米。
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