怀山药组培快繁技术实例含配方

怀山药(Dioscorea opposita Thunb.)又名薯蓣，为薯蓣科薯蓣属的一种多年生缠绕性草本植物，本研究以其茎段作为外植体进行了培养，成功地建立了怀山药的繁殖体系。

1 试验方法

1.1 外植体选择和处理

将外植体用自来水反复冲洗后，在无菌条件下用75%酒精消毒30秒，用无菌水漂洗3-5次，再用0.1%的升汞溶液消毒8-10分钟，无菌水冲洗2-3次，带接种。

1.2 初代培养

将外植体切成长0.7厘米左右的带节茎段，并横放接种到愈伤组织诱导培养基MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 2.0mg/L上，培养2周后，外植体两端出现白色或淡黄色愈伤组织，培养4周后即可用于继代增殖培养。

1.3 继代增殖培养

将初代培养获得的茎段愈伤组织继代繁殖1次，再转接到不定芽或多芽体诱导培养基MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 0.2mg L上，1周后可见有芽萌发生长，20天形成多芽体，35-40天分化出大量的丛生芽。不定芽长达2cm以上时，从外植体茎节基部切下分成单芽(也可以将芽长5-7厘米的无菌短枝切割成单芽茎段)，接种到试管苗快繁培养基MS + KT 2.0mg/L + NAA 0.02mg/L + PP₃₃₃ 0.1mg/L中，5-7天就可以见芽体有明显的增粗，生长和伸长生长，10天后开始有新的芽体出现，成为丛生芽。以后每30天继代1次，继代增殖系数一般为3-5倍。

1.4 生根培养

芽体生长至4-6厘米长，具有3-4片展开叶的健壮小苗时，转到生根诱导培养基1/2 MS + IBA 1.0mg/L中，接种10天后开始生根，20天后根长可达3-6厘米，有时也可在幼茎的叶腋处生出少量的细根。

1.5 培养条件

以上培养基均附加30g/L蔗糖（生根培养基为20g/L），7g/L琼脂，pH值5.8。培养温度为24±2℃，光培养时光照度为2000lx，光照12小时/天。