肾蕨(Nephrolepis auriculata)又名篦子草、蜈蚣草等,是肾蕨科肾蕨属骨碎补科多年生常绿草本植物,肾蕨的常规繁殖方式为分株,其繁殖系数低,且易造成植株品种退化,观赏性下降。利用组织培养技术可极大地提高繁殖系数,保持品种观赏特性。本研究以肾蕨的匍匐茎茎尖为外植体对其离体培养技术进行了研究。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
取肾蕨匍匐茎茎尖为外植体。在超净台上于75%酒精浸泡30秒,用无菌水冲洗一次,再用0.1%的升汞消毒5-6分钟,无菌水冲洗4-5次,无菌滤纸吸干,在解剖镜下拨取0.2-0.5毫米大小茎尖,接种到诱导培养基上。
1.2 初代培养
将处理好的茎尖接种到诱导培养基MS + 6-BA 0.7mg/L上,培养5-9天后茎尖开始萌动,15-30天后可形成配子体或绿色小体(GGB)。绿色小体是类似兰花圆球茎的绿色球状体(Green Globular Bodies,GGB),是蕨类植物中特有的结构。
1.3 继代增殖培养
将GGB团分割成0.5厘米左右大小,转接到继代增殖培养基MS + 6-BA 0.7mg/L + NAA 0.7mg/L上培养,培养30天左右,孢子体分化率可达82%,增殖系数达5.3。
1.4 生根培养
选取3-5厘米以上的健壮的单棵无菌苗,移至生根培养基MS + NAA 0.2mg/L +活性炭 1g/L上培养,培养20天左右,生根率达100%,根粗长,根毛多,无菌苗长势佳。
1.5 培养条件
以上培养基均附加30g/L蔗糖(生根培养基为20g/L),7g/L琼脂,pH值5.8。培养温度为24±2℃,光培养时光照度为1500lx,光照12小时/天。
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