甜瓜(Cucumis melo L.)属于葫芦科甜瓜属(Cucumis)植物,本试验以厚皮甜瓜中的中华伊丽莎白甜瓜品种的子叶作为外植体进行组织培养,建立起再生体系,以期对甜瓜工厂化生产提供技术参考。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
将甜瓜种子精心去壳后,进行表面灭菌。具体方法是用70%的乙醇溶液浸泡30秒,无菌水冲洗3-5次,再用0.1%的升汞浸泡8-10分钟,无菌水冲洗3-5次。然后将已灭菌的种子接种于MS(不含激素)发芽培养基上,置于25℃的黑暗环境中培养,以诱导发芽,获得无菌苗。
选择3-5天龄无菌苗,置于超净工作台上,从距离茎轴约1-2毫米处切取子叶,并将每片子叶横切为2片,弃去远轴端半片,取近轴端半片作为外植体。应注意:甜瓜子叶外植体的日龄越小越好,而且不要带子叶柄及其基部的潜伏腋芽。
1.2 初代培养
将上述外植体于无菌条件下以子叶正面向上的方式接种到丛生芽诱导培养基MS + 6-BA 1.5mg/L + IAA 0.2mg/L上,培养3-5天左右,外植体在切口处长出 细小、鲜绿、生长旺盛的愈伤组织。2周后愈伤组织开始长出芽原基,进而形成丛生芽。出芽部位多集中在外植体近下胚轴一端切口边缘与维管束的交接处,有些芽原基可以在未产生 愈伤组织部位直接产生。
1.3 继代增殖培养
当初代培养获得的丛生芽长至1-2厘米时,分割成基部带有少量愈伤组织的单芽,转接到继代增殖培养基MS + 6-BA 0.3mg/L + IAA 0.05mg/L上培养,增殖系数可达5-10。经过一段时间培养后,将继代增殖芽的基部愈伤组织切除,并移至伸长生长培养基MS培养基或MS + 6-BA 0.05mg/L中进行伸长培养。
1.4 生根培养
伸长培养2-3周后,不定芽长至2-3厘米时,自茎基部切下,移至生根培养基1/2MS + IAA 0.2mg/L上培养,1-2周即可观察到根的发生,每株根数在3-8条左右,生根率高达98%以上。
1.5 培养条件
以上培养基均附加30g/L蔗糖,7g/L琼脂,pH值5.8。培养温度为25±2℃,光培养时光照度为3000lx,光照16小时/天。
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