晚香玉(Polianthes tuberose.L)又名夜来香、月下香、玉簪花,为石蒜科晚香玉属多年生宿根草本植物。本研究主要是探讨诱导晚香玉叶片的愈伤组织、丛生芽和生根的较适合的培养基种类以及激素的配合,为建立高效的再生体系及今后的转基因方面的研究打下基础。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
切取晚香玉单瓣、重瓣的新生叶片用自来水冲洗干净,放入洗衣粉水中浸泡20分钟,然后在自来水下连续冲洗2个小时,之后用滤纸吸干水分放在超净工作台上备用。
75%的酒精浸泡叶片10秒,无菌水冲洗2次,0.1%升汞浸泡叶片2分钟,无菌水浸泡5-8次,一次5分钟,用无菌玻璃棒不断搅拌,放在无菌滤纸上吸干水分,切成1平方厘米左右接种。
1.2 愈伤组织诱导培养
将上述处理后的外植体接种到诱导培养基MS + 6-BA 1.5mg/L + NAA 0.5mg/L + 蔗糖 30g/L上,5天后,叶片边缘普遍肿胀、皱曲,部分叶片表面隆起,10天后叶片切口处可见白色、淡黄或淡绿色愈伤组织产生。20天后,切片边缘密生黄色或绿色愈伤组织。30天后,愈伤组织迅速增殖膨大呈瘤状,20天转接一次,可以获得大量愈伤组织。
1.3 诱导分化培养
将诱导出的愈伤组织切切块,转接到继代增殖培养基MS + 6-BA 0.5mg/L + NAA 0.2mg/L上 + 蔗糖 25g/L,经30天左右,丛生芽数量多,生长较快,长势好,多为嫩绿色,且基部有小鳞茎生成。
1.4 生根培养
将长度约2厘米左右且基部带有小鳞茎的芽接种在生根培养基1/2MS + NAA 0.5mg/L + KT 0.2mg/L + 6-BA 0.2mg/L + 蔗糖 20g/L上培养20天左右,平均根长度2厘米左右。
1.5 培养条件
以上培养基均附加,7g/L琼脂,pH值5.6-5.8。培养温度为20±5℃,光培养时光照度为1500lx,光照12小时/天。
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