毛慈菇为兰科多年生草本植物,杜鹃兰的假球茎,毛慈菇种子发育不完全,发芽率较低,在自然状态下繁殖极困难。常规以假球茎繁殖,其繁殖周期长、用种量大,繁殖率低。同时长年以假球茎繁殖使病毒侵染,造成种性退化,严重影响毛慈菇的产量及质量,难以满足市场需求。本研究采用组织培养技术,以达到脱毒、复壮、快繁之目的。为建立毛慈菇优质种苗快繁的工厂化生产提供技术参考和依据。
1 试验方法
1.1 外植体选择和处理
将毛慈菇假球茎上的不定芽切下,作为外植体。
将不定芽用洗衣粉漂洗后再用流水冲洗干净。 在无菌条件下用75%酒精表面消毒后,再用0.1%升汞消毒12分钟,用无菌水反复冲冼8-10次,滤干后待接种。
1.2 根状茎诱导培养
将上述处理后的不定芽接种到诱导培养基White + NAA 0.1mg/L + 香蕉 100g/L上,暗培养30天左右,芽开始分化,40天左右可以分化出小米般大小的白色小球点,50天左右白色小球点开始伸长形成根状茎,诱导率100%。
1.3 根状茎继代增殖培养
将诱导出的根状茎切成0.5-1厘米长,转接到继代增殖培养基MS + 6-BA 3.0mg/L + NAA 0.1mg/L上,经30天左右培养可分化形成数个白色小圆球突起,上面有白色绒毛,40天左右白色小球点伸长分化形成丛生根状茎。
1.4 芽苗分化培养
经2-3次继代后,根状茎在暗培养中增粗、伸长约2-3厘米,然后将其切下转接于芽分化培养基MS + 6-BA 3.0mg/L + NAA 0.2mg/L中,经20天左右的光培养,根状茎开始分化形成绿色小苗。
1.5 生根培养
将分化出的小苗接种在生根培养基1/2MS + NAA 1.0mg/L上培养,20天左右可分化出不定根,生根率达95%。
1.6 培养条件
以上培养基均附加20g/L蔗糖,4g/L琼脂,pH值5.6-5.8。培养温度为20±5℃,光培养时光照度为1000lx,光照10小时/天。
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