唐菖蒲(Gladiolus X gandavensis Van Houtte)是鸢尾科、唐菖蒲植物,多年生草本。它常规上采用分植子球茎的方法进行繁殖。一方面增殖率较低,另一方面长期无性繁殖,易感染病毒而引发病毒病,使得植株变弱,花朵较小,只有用组织培养脱毒技术才能去除病毒,快速增殖。本文就唐菖蒲的组织培养快繁技术报告如下。
1 试验材料
以经过低温冷藏处理1个月的成熟子球为外植体。
2 试验方法
2.1 外植体选择和处理
去掉外层的包衣,清洗干净,先用70%的酒精消毒30秒,再用0.1%的升汞消毒10分钟,无菌水冲洗3次,在无菌条件下,将每个子球切成4块,待接种。
2.2 愈伤组织诱导
将上述处理后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基MS + 6-BA 0.2mg/L + 2,4-D 2mg/L上,接种1周后,子球的表面逐渐膨大,形成白色瘤状突起,组织疏松,为疏松愈伤组织。随着培养时间的延长3-4周后,部分的瘤状突起颜色逐渐由白色变为淡黄色或黄色,组织变得坚硬,形成致密愈伤组织,致密愈伤组织再经1-2周的发育,可形成具有胚分化能力的胚性愈伤组织。
2.3 芽诱导培养
将培养6-8周的淡黄色或黄色的胚性愈伤组织转移到芽诱导分化培养基MS + 6-BA 2.0mg/L + KT 2.0mg/L + NAA 0.5mg/L上进行芽体和小芽的诱导,接种2周后,在愈伤组织表面逐渐出现绿色斑点突起,继而形成芽体,随着培养时间的延长,这些芽体逐渐发育小芽,长出茎尖和叶片。
2.4 壮苗及生根培养
上述所形成的丛生芽,由于比较纤细,直接进行根的诱导难以成功,必须经过壮苗培养过程,方可生长健壮,有利于根的诱导。
将丛生芽中的小芽切下分离成单株,接种在壮苗培养基MS + 6-BA 1mg/L上培养1-2周,然后,再转管接种到生根培养基MS(不加激素)上,1-2周后在植株的底部有白色瘤状突起,进而形成白色的根系,发育成完整植株。
2.5 培养条件
以上培养基均附加30g/L蔗糖,7g/L琼脂,pH值5.8。培养温度为25±2℃,光照度为1500-2000lx,光照12小时/天。
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