食用蔗(Saccharum officinarum)是甘蔗属,多年生高大实心草本,食用蔗感染花叶病毒严重,使糖分和产量下降(约18%左右),种性衰退,品质退化;加之为常规繁殖(无性繁殖),繁殖速度缓慢,系数低;用种量大,消耗原料蔗过多;并且留种、贮藏费时费力,成本高,影响其生产。为解决这些问题,本试验就食用蔗脱毒和组培快繁的技术和方法介绍如下。
1 试验材料
以食用蔗的心叶作为外植体。
2 预培养
热处理:将培养物放人光照培养箱中,温度为38℃,时间1个月。
3 试验方法
3.1 外植体处理
将供试甘蔗梢部砍下,用75%的酒精擦洗,在无菌条件下逐层剥去外叶,留下直径约为0.5-1厘米的心叶,切成约1毫米厚的薄片,备用。
3.2 愈伤组织诱导培养
将上述处理后的外植体接种到诱导培养基MS + 2,4-D 2.0mg/L上,经过一段时间培养,可得到白色而疏松的愈伤组织。
3.3 分化诱导培养
将诱导阶段形成的愈伤组织块转接到分化培养基MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 0.3mg/L中,便分化出丛芽,每隔 25-30天转接一次,即可得到大量的芽(苗)。
3.4 生根培养
待分化苗高达5-6厘米时,以4-5苗为一丛,转入生根培养基1/2MS的大量元素 + IAA 2.0mg/L上,经3-5天培养,苗基部开始有白色根突出;7-10天,苗基部生长3-4条白色须根,根细长,生根率可达100%;25-30天,苗基部长出的须根可布满培养瓶底部,平均根长2-3厘米。
3.5 培养条件
以上培养基均附加30g/L蔗糖,7g/L琼脂,pH值6.0。培养温度为28±1℃,光照度为1000-1500lx,光照10小时/天。
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