半夏(Pinellia ternata)为天南星科半夏属多年生草本植物,半夏作为一种常用大宗药材,已开始人工栽培,生产上多采用小块茎、珠芽等方法进行繁殖,且多代无性繁殖易受病毒侵染进而导致产量和品质下降。本研究以云南昭通野生半夏块茎为材料,对半夏组培快繁体系的建立进行研究。
1 试验材料
云南昭通野生半夏块茎为外植体。
2 试验方法
2.1 外植体消毒
直径1厘米左右半夏块茎洗净去皮,自来水冲洗1小时,在超净工作台上用75%酒精浸泡30秒,无菌水冲洗3次、2%次氯酸钠+1.67g/L头孢拉定浸泡15分钟,用无菌水冲洗5次后,接种于1/2MS基本培养基培养30天。
2.2 芽诱导培养
将上述培养30天的茎块切取茎尖,接种到芽诱导培养基MS + NAA 0.3mg/L + 6-BA 1.0mg/L + KT 0.6mg/L上,接种7天后,茎尖抽生叶片;20天后茎尖周围形成大量芽点;30天后茎尖环生大量不定芽,诱导率达到85.19% 。
2.3 芽增殖培养
将芽诱导材料切分为3-5株一丛,接种于继代培养基MS + 6-BA 1.0mg/L + NAA 0.1mg/L上,7天后可见幼芽形成,20天后可见芽丛下部形成块茎,不定芽越多,块茎越大,并不断增大,部分可见不定根从块茎上方长出。
2.4 生根培养
选取生长健壮丛生芽,将其切分为单株小苗转接到生根培养基1/2MS + IBA 0.5mg/L中,培养30天,根细且长,基部肥大,根毛多,乳白色。
2.5 培养条件
以上培养基均附加30g/L蔗糖,7g/L琼脂,pH值5.8。培养温度为25℃,光照度为2000lx,光照12小时/天。
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