食用仙人掌(Opuntia milpa ala haw)属于仙人掌(Cacaceas)科,多年生厚肉多浆植物,食用仙人掌传统繁殖是以茎节扦插的方式进行无性繁殖,这种方式繁殖速度较慢,大田生长不整齐,而且容易传染病菌,产量不稳定,对产业的快速发展有较大的制约性。植物组织培养可以克服传统繁殖的弱点,使繁殖系数成倍性增大,提高种苗质量,这是发展食用仙人掌种苗的有效途径。
1 试验材料
选用健壮无病的仙人掌片,最好取10-30天嫩片做外植体。
2 试验方法
2.1 外植体消毒
将嫩片先用清洁精漂洗一次,再用清水冲洗30分钟,洗净后用无菌瓶装好,放到超净工作台消毒。常用的消毒方法是先用70%酒精浸10-30秒,无菌水冲洗后,再用0.1%的升汞浸渍10-20分钟,消毒液最好加1-2滴吐温,便于消毒液的渗透。消毒时间要根据材料的老嫩来掌控,一般材料越嫩消毒时间越短。消毒后马上用无菌水冲洗4-6次,吸去仙人掌表面的水分,待用。
2.2 芽诱导培养
将上述处理后的仙人掌嫩片切成1-2厘米见方的小块,每块必须带有一个芽点,接种到诱导培养基MS + NAA 0.3mg/L + 6-BA 1.0mg/L + KT 0.5mg/L上,先在1000lx以下较弱的光线下培养一周,没有受到感染和伤害的外植体,一般开始突起萌发,先是在芽的部位出现突起,后形成丛生状的肉刺;然后放到1500-3000lx光照条件下培养,每天光照12-16h,培养30-40天,将会长出单芽或丛生芽。
2.3 芽增殖培养
将诱导芽切分成2厘米左右的芽段,转接到继代增殖培养基MS + NAA 0.2mg/L + 6-BA 1.0mg/L上,30d后一个小节可以发出2-8个小芽,有些产生了二级芽而形成密集的丛芽。
2.4 生根培养
当仙人掌继代芽达到3厘米以上时,将芽切成3厘米的芽段,接在组合为1/2MS + NAA 0.2mg/L的生根培养基上。接种后培养温度为25℃左右,培养光照分两阶段,生根前用较弱的自然光线培养,生根后放到3000lx光照条件下培养,每天光照12-16小时。一般5-6天开始生根,10天可以达到98%以上
2.5 炼苗移栽
生根培养20-25天可以把瓶苗放在室外练苗,移栽前的2-3天,可以开瓶练苗,但要注意不要放在强光下练苗。移栽前把瓶苗的培养基用清水洗净,移栽于消毒好的苗床基质中,混合基质比例是熟土、泥炭和珍珠岩1∶1:1,相对湿度保持在90%以上,弱光。7天后,可以逐步增加光照,湿度保持在60%-70%即可。
2.6 培养条件
以上培养基均附加30g/L蔗糖,7g/L琼脂,pH值5.8-6.0。培养温度为25℃左右,光照度为1500-2200lx,光照12-16小时/天。
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