罗汉果(Gerbera jamesonii Bolus)是葫芦科,多年生藤本植物。一般采用扦插或压条方式进行种苗的繁殖,繁殖系数低,种质因病毒感染逐年退化,严重制约了罗汉果的扩大度和种苗质量。利用组培技术培养种苗,可以在脱毒的基础上,无毒化扩大种苗的繁殖,提高繁殖速,这是大力发展罗汉果产业,提高经济产量的有力技术手段。
1 试验材料
选取健康无病毒的嫩梢,取茎尖以下第2-5个芽的茎段做外植体。
2 试验方法
2.1 外植体消毒
将茎段先用1-2滴洗洁精清洗,再用清水冲洗30分钟,然后到无菌操作台进一步消毒。先添加数滴吐温,再用的0.1%升汞溶液消毒3-5分钟,最后用无菌水清洗5-6次,放入无菌空瓶待接。
2.2 芽诱导培养
将消毒好的材料切成长0.5-1厘米的带芽茎段,接种到诱导培养基MS + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.2mg/L + 琼脂粉 7g/L + 蔗糖 30g/L上,pH值6.0,培养温度为25℃左右,光照强度开始用1000lx以下的较弱光线培养1周,没有受到感染和伤害的外植体,一般芽开始萌发,然后放到3000lx光照条件下培养,每天光照12-16小时,培养30-40天后黄绿色的腋芽从叶腋处被诱导出来,诱导率达80%以上,然后将这些无菌芽转接到继代培养基中。茎段基部同时会产生少量白色海绵状愈伤组织,但很难分化成芽,不会影响芽的增殖。
2.3 芽增殖培养
当初代培养的腋芽长到3-6厘米时,将其切成带1个腋芽的茎段,转接到继代增殖培养基MS + 6-BA 0.8mg/L + IBA 0.2mg/L + 琼脂粉 7g/L + 蔗糖 30g/L上,培养温度为25-30℃,光照强度为3000lx。15天后丛芽萌发,30天增殖倍数达2-3倍,第四代后增殖倍数最高达8倍。
2.4 生根培养
将继代的芽切成2-3厘米长的芽段,接种在生根培养基MS + IBA 0.2mg/L上培养。在25-30℃,光照强度为1000-30001x的条件下培养,7天开始发白根,15天生根率达到90%以上,然后放在自然散射光20001x下炼苗一周。
2.5 炼苗移栽
将已变为青绿色的罗汉果组培苗的培养瓶盖去掉,让苗在自然光下炼苗3天,然后从培养瓶中取出,用清水洗掉培养基,再用0.01%高锰酸钾溶液浸泡消毒1分钟,后用清水冲洗1次,种植在装有50%泥土+30%泥炭土+20%珍珠岩的苗床上,在50%透光率的大棚内培养,棚内温度为,25-32℃,移植后7天内保持空气湿度95%以上。
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