矮牵牛(Petunia hybrdia) 又名碧冬茄,为茄科多年生草本花卉,瓣矮牵牛为矮牵牛与腋花矮牵牛的杂交品种,由于是杂交品种,结实率低,用种子繁殖其后代性状易分离退化,扦插繁殖又受材料的限制,所以组织培养是解决重瓣品种的繁殖材料供不应求问题的有效方法。
1 试验材料
重瓣矮牵牛的组织培养以茎尖作外植体,在此之前2-3周,把母株置于温室内培养,不向枝叶部分喷水施药,选用新长出的茎段取材。
2 试验方法
2.1 外植体消毒
把采回的嫩茎流水冲洗3小时,采用2%次氯酸钠消毒10分钟,再浸没在0.1%升汞中分钟,无菌水冲洗5遍,吸干水分,把已经灭菌的茎尖、茎段切成0.5cm长,备用。
2.2 芽诱导培养
将上述处理后的外植体接种到不定芽诱导萌动培养基MS + NAA 0.2mg/L + 6-BA 0.5mg/L上,当培养2-3周后会有愈伤组织出现。随着培养的继续,在愈伤组织上会出现绿色突起,以后这些突起会分化出嫩茎。
2.3 芽增殖培养
把接种诱导出的嫩茎切割成1cm长的茎段或者在茎段未长出之前,把成丛组织块切割成1平米厘米的小块,接种于继代增殖培养基MS + 6-BA 0.5mg/L + NAA 0.05mg/L上,进行增殖培养。
2.4 生根培养
当嫩茎长到1.5cm长时,即可把它们剪下来转移到生根培养基1/2MS + NAA 0.1mg/L上,进行生根诱导培养。
2.5 炼苗移栽
当生根瓶苗嫩茎长出4-5条1-1.5厘米长的新根时,即可进行出瓶。先移入驯化室炼苗3天,再开盖炼苗2天,之后出瓶洗根移栽,基质采用经过灭菌的蛭石或其他无土基质。出瓶后要把湿度保持在80%-90%,遮光率为60%,温度达到16-20℃,经过1-2个月的管理,即可定植于富含腐殖质的钵苗培养土中。浇水不要太多,结合喷水喷施液体肥料,逐渐加大光照量直到完全自然光照培养。
2.6 培养条件
以上培养基均附加30g/L蔗糖,6-7g/L琼脂,pH值5.8。培养温度22-25℃,光照度为1500-2000lx,光照10-12小时/天。
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