马蹄莲(Zantedeschia) 属于天南星科马蹄莲属(Zantedeschia) 多年生草本球根花卉,本研究以彩色马蹄莲中的黄花马蹄莲的块茎或芽块为外植体的组织培养 为案例,对其再生体系的建立做以介绍。
1 试验材料
选取黄花马蹄莲的侧生块茎或芽块作为外植体。
2 试验方法
2.1 外植体消毒
将采集回来的外植体,用自来水冲洗干净。先用70%-75%的酒精溶液消毒20-30秒,无菌水冲洗2-3次,再用0.1%的升汞溶液消毒8-10分钟,无菌水冲洗2-3次。然后将块茎切分成2-3厘米厚的薄片或分割为带芽小块,备用。
2.2 芽诱导培养
将上述处理后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基MS + NAA 0.5mg/L + 6-BA 2.0mg/L + 蔗糖 30g/L + 琼脂粉 7g/L上,2周后,出现愈伤组织或从带芽茎块上长出嫩芽。继续培养60天后,大部分芽块基部形成致密具绿色芽点的愈伤组织块,并有大量不定小芽生出。
2.3 芽增殖培养
在愈伤组织和芽分化的基础上,根据试管苗生长状况,将彩色马蹄莲丛生块茎纵切,切去过长叶片,保留块茎基部小叶,每小块上保留4-6个小芽,接种于继代增殖培养基MS + 6-BA 3.0mg/L + NAA 0.2mg/L + 蔗糖 20g/L + 琼脂粉 7g/L上,经培养1-2周后,在芽体周围开始形成丛生小芽,其增殖系数可达4-5。
2.4 生根培养
将继代培养的2-3厘米高的丛生芽做基础苗分割成单芽,接种到MS培养基上进行壮苗培养。取生长健壮、高为3.0-4.0厘米的组培苗,转入生根培养基1/2MS + NAA 0.5mg/L + 蔗糖 20g/L中进行生根诱导,7-10天陆续生根,2-3周后从芽基部生出2-4条不定根,生根率可高达100%。继续培养至苗生出3-5片嫩绿的幼叶。
2.5 炼苗移栽
当马蹄莲再生植株的不定根长达2cm以上时,打开培养瓶盖, 在室温下炼苗5-7天,然后将其小心自瓶中取出,洗净根部培养基后置于0.1%的多菌灵溶液中浸泡1-2小时,选择根茎正常、基部无愈伤组织的试管苗移入已灭过菌的栽培基质( 由珍珠岩、蛭石、沙土按 1:1:2的比例混合配制而成中。移栽后,立即喷水淋湿栽培基质并注意保湿和遮荫。2周后当苗长出新叶和新根时,每周喷施1/4MS营养液1次以补充养。移栽苗1个月以后开始迅速生长,此时应适当增加光照,并辅助叶片施肥。
2.6 培养条件
培养温度25℃±2,光照度为2000lx,光照12-14小时/天。
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