红叶石楠(Photinia fraseri) 属蔷薇科石楠属常绿灌木或乔木,红叶石楠用常规繁殖方法繁殖,速度缓慢,繁殖系数低。用组织培养法可大大加快其繁殖速度,现将其组培快繁技术介绍如下。
1 试验材料
5月中旬,选择生长健壮且无病虫害的一年生幼苗,取其当年萌发的春梢先端作为外植体。
2 试验方法
2.1 外植体消毒
将采集回来的枝条除叶片,保留叶柄,将枝条切成2-3厘米的茎段。先用10%洗衣粉溶液浸泡15分钟,在自来水流水下冲洗30分钟,置于超净工作台上,再用75%乙醇溶液浸泡30秒,用0.1%的升汞溶液(加2-3滴吐温-20)灭菌10-15分钟。然后用无菌水冲洗3-5遍后,备用。
2.2 芽诱导培养
将上述处理后的外植体接种到MS固体培养基上,培养20天后,转接到休眠芽诱导萌动培养基MS + NAA 0.05mg/L + 6-BA 2.0mg/L上,5-7天茎尖开始萌动,10天腋芽萌动,芽逐渐长大,继续培养20天,茎段上所有腋芽均萌发出侧枝。侧枝生长正常,叶片深绿色,茎段基部有少量的黄绿色愈伤组织。
2.3 芽增殖培养
将试管苗侧枝切割成带2-3芽的茎段,接种于继代增殖培养基MS + 6-BA 1.5mg/L + IAA 0.2mg/L上,10天后茎段腋芽萌动,30天长出大量侧枝,并有大量双生枝和三生枝产生;接种茎段形成具有5-8侧枝的丛生苗,平均增长5.8倍,试管苗节间明显伸长,嫩叶、茎秆均呈淡红色,叶片大,茎秆较粗,组织不充实,茎基部愈伤组织大,以后每30天继代1次,经3-4次继代后,需壮苗处理。
2.4 壮苗培养
将经增殖培养的试管苗每继代3-4次后转移到壮苗培养基MS + NAA 0.5mg/L + 6-BA 0.5mg/L上。40天后形成大量侧枝,平均增殖3.1倍。侧枝生长健壮,基本上无双生枝或三生枝,组织充实,叶色深绿,其基部愈伤组织小,无玻璃化苗现象。
2.5 生根培养
将生长健壮、高于1.2cm的侧枝分割,转移 到生根培养基1/2MS + NAA 0.5mg/L + IBA 0.2mg/L上。此时,光照度提高至2500-3000lux,光照时间延长至16小时/天,经培养15天,其基部形成根原基;培养20-25天生根率为66.3%,每苗平均生根1-2条。
2.6 炼苗移栽
将生根试管苗带瓶移人栽培温室,培养1周 周。当根长0.5-1厘米时,开瓶炼苗3-5天, 将生根苗轻轻取出,并洗净根部培养基,栽植于育苗穴盘中,以黑泥炭为基质,温度控制在 20~25℃,湿度为85%-95%,20天即可成活,成活率达70%以上。
2.7 培养条件
以上培养基均附加20g/L蔗糖,7g/L琼脂,pH值6.0-6.2。培养温度白天为25-30℃,夜间为15-20℃,光照度为2000-2500lx,光照14小时/天。
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