乌皮樱桃(Prunus pseudocerasus L.)是蔷薇科樱属木本植物,适合南方各省气候条件的中国樱桃优良品种。目前该品种的栽培苗木均为嫁接苗,由于受接穗的影响,无论是苗木质量、数量和品种纯度都难以满足当前生产需要。本研究是在获得茎尖无病毒芽的基础上,进行了快繁技术全过程研究,为工厂化繁育优质脱毒苗奠定基础。
1 试验材料
以乌皮樱桃的成熟休眠枝为外植体。
2 试验方法
2.1 外植体消毒
在萌芽前采集健壮的枝条,用洗涤剂清洁表面,流水冲洗2-3小时,剪成单芽节段,装在磨口玻璃瓶中。
在超净工作台内用70%的酒精浸泡消毒30秒,无菌水冲洗1次,再用0.2%的升汞溶液表面灭菌15分钟,期间不断摇动,无菌水冲洗4次;滤纸吸干后,除去材料两端受伤切面,剪成0.5厘米长的单芽节段,备用。
2.2 芽萌动培养
将上述处理的外植体接种于诱导芽萌动培养基MS + 6-BA 0.2mg/L + IAA 0.1mg/L上,培养7天左右芽开始抽发嫩梢,15天左右新芽长1厘米左右。
2.3 芽诱导培养
将新芽切取0.5厘米茎尖接种到芽诱导培养基MS + 6-BA 1.0mg/L + IAA 0.2mg/L上诱导丛生芽,5天后切块面产生乳白色愈伤组织,15天左右在腋芽和切口产生10-30个丛生芽,芽体生长健壮,叶片浓绿宽厚。
2.4 芽增殖培养
芽诱导培养后形成的生长健壮的含有多个芽的芽丛切割成单芽,并将芽丛中2cm 以上的单芽切割成含有一个腋芽的茎段接种在芽增殖培养基MS + 6-BA 0.8 mg/L + IAA 0.2 mg/L + GA3 0.5 mg/L上,继代周期为30天。
2.5 壮苗生根培养
将继代培养获得的健壮芽接种到生根培养基1/2MS + NAA 0.5mg/L上。5天后切口处形成少量愈伤组织,10天左右即可分化出根原基,15天左右生长出4-7条短状根,25天左右根系长1厘米。
2.6培养条件
培养基中均添加3%的蔗糖和0.65%的琼脂,pH值均为6.0,培养温度25±2℃,光照强度2000lux,光照时间12小时/天。
评论