康平寿(Haworthia comptoniana)是百合科十二卷属的小型肉质植物,原产于南非。植株较矮,叶呈莲座状排列,叶顶端透明并有花纹,形成美丽的“窗”。
本研究以康平寿花茎为外植体进行组织培养,探讨其再生体系,解决康平寿的繁殖与普及问题。
1 材料与方法
1.1 外植体材料及培养条件
1.1.1 外植体选择
成年康平寿的春生花茎(其中大部分花蕾已出现,但尚未开放)。
1.1.2 外植体预处理及灭菌
将取下的材料经流水冲洗15分钟,1%新洁尔灭浸洗10分钟,无菌水冲洗3次,0.1%升汞溶液(加入吐温-20 1mL)8分钟,无菌水再冲洗7-8次。将消毒的材料置于无菌滤纸上,剪成1厘米左右的小段,即成外植体。
1.1.3 培养条件
启动培养基:MS + 6-BA2mg/L + KT 1mg/L + NAA 0.2mg/L
分化培养基:MS + 6-BA1mg/L + KT 1mg/L
增殖培养基:MS + 6-BA0.5mg/L + KT 0.5mg/L + NAA 0.1mg/L
壮苗生根培养基:1/2MS +NAA 0.1mg/L
以上培养基均加蔗糖3%,琼脂0.7%,pH值5.8。
培养温度为(25±2)℃,光照强度为2000lx,光照时长为8时/天。
2 结果与分析
2.1 初代启动培养
将康平寿的外植体接入启动培养基上,20-30天后花子房部或花茎截面膨大,形成黄绿色疏松的小球状愈伤组织,增殖速度较快,可见愈伤组织表面出现绿色小点并有分化迹象。
将此时形成的愈伤组织转于相同的培养基,可大量增殖,15天后形成整瓶愈伤组织,这对该植物的快繁和种质保存有一定意义。
2.2 分化培养
将上述培养物转入分化培养基中,30天后愈伤组织上形成无数浓绿色小点,继而形成绿色球状小体(GCB),而后开始分化,再经过15天后能形成大量丛生芽。
2.3 芽的增殖培养
将上述培养物转入增殖培养基上。大约20天后各瓶都可以形成丛生苗。将苗丛分割后增殖速度较适中,芽基部无愈伤组织或有极少愈伤组织形成,植株易分离,同时大约10%的苗有2-3条很细的须根生成,且有壮苗效果。
继代时间以20天左右1次较好,此时苗的繁殖系数可达到3-4倍。这样得到的苗生长情况较好,出瓶容易。
2.4 壮苗生根培养
在增殖培养基上得到的苗有些已生根,可剪取有根大苗直接出瓶,但最好先转入生根培养基中培养1-2个月左右,可使苗较快地生长。
在转入生根培养基后,需要增大光照度到3000lx,最好使用散射阳光,生根率达90%以上。
2.5 炼苗移栽
采用蛭石和珍珠岩(2:1)的混合基质,经高压灭菌后装入苗钵,距顶端大约5厘米。
将开口炼苗2天的出瓶苗取出风干1-2天(此时新生的须根部分干枯,但根原基仍保留,新根会很快萌发),然后均匀插入基质中,适当保湿。用低浓度的多菌灵溶液浇灌,逐渐见光。
经试验发现,用散射日光代替荧光可提高成活率到98%以上。其中不经生根的苗成活缓冲期很长(4-6周),而经生根的苗缓冲期仅2周,便可见生长。经日光灯照射的生根苗明显不如用散射光培养的苗,无论长势还是缓冲期的长短,前者都逊色于后者。
另外,出瓶苗适当风干对该种肉质植物的新根萌发有一定的促进作用。
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