矾根(Heuchera micrantha) 又名珊瑚铃,为虎耳草科矾根属多年生草本花卉,目前,矾根植物的繁殖方式有叶插、分株和组培方式,但前2种方式繁殖速度较慢,不能满足市场需求。因此,建立组织培养快速繁殖体系是解决优良品种种苗短缺的最有效途径。
矾根属植物的组织培养,已见有报道,但外植体多数选择新芽或腋芽茎段等。这种快繁体系受母本外植体限制,外植体简单消毒后污染率过高,过度消毒又易形成褐变,无菌系建立比较困难。因此,本研究以花序轴为外植体,摸索矾根品种花毯的离体再生快繁体系,以期为该品种的工厂化繁殖提供理论依据。
1 试验材料
3月份初花期的花序轴外植体诱导愈伤容易,但基本不分化。4月中旬的花序轴污染率高,这可能与植物材料组织的成熟程度相关,一般而言材料越成熟,组织内的共生菌越多,消毒亦困难。结合愈伤状态和分化情况,选择4月上旬矾根‘花毯'花期中期的花序轴为外植体,不仅污染率低,愈伤状态好且易分化。
2 试验方法
2.1 外植体消毒
把采集的花序轴用自来水冲洗30分钟以上;在超净工作台内用75%的酒精浸泡消毒10~20秒,无菌水冲洗2次,再用0.1%的升汞溶液消毒12分钟,无菌水冲洗3-4次;滤纸吸干后,切除两端受伤部分,切至2厘米长茎段,备用。
2.2 芽诱导培养
将上述外植体处理后接种在诱导培养基MS + 6-BA 0.6mg/L + IBA 0.02mg/L上,经过30天的培养,愈伤组织致密,生长快,后期分化好。
2.3 丛生芽增殖培养
将初代诱导分化的组培苗,分株剥离保留至健壮的1腋芽3叶片的单株,接入继代培养基MS + 6-BA 0.2 mg/L + IBA 0.02mg/L上,接种后30天左右可观察芽的增殖情况,增殖系数9.2,芽生长状况好。
2.4 生根培养
选取继代增殖中生长健壮的枝条,转接到生根培养基MS + IBA 1mg/L上。培养2周后有不定根产生,30天时培养基生根率可达98%,根系粗壮,伸入培养基,叶片正常,无玻璃状。
2.5培养条件
培养基中均添加3%的蔗糖和0.75%的琼脂,pH值均为5.8-6.0,培养温度25±2℃,光照强度3000lux,光照时间12小时/天。
2.6 组培苗移栽
出瓶前,将组培瓶不开盖放置温室内驯化3天,开盖洗净根系培养基后,栽于泥炭土:蛭石体积3:1,成活率达85.11%。
评论