葡萄是葡萄科(Vitacvae)葡萄属(Vitis)多年落叶藤本植物，生产上葡萄育苗主要采用扦插繁殖，但长期采用扦插繁殖，容易导致品种退化、尤其在南方多雨地区，扦插苗易受病虫感染影响苗木质量。，因此，该试验从葡萄组织培养的外植体选择、愈伤组织、茎叶分化、不定根诱导优化及试管苗的练苗移栽过程进行研究，系统研究葡萄组织培养快速繁殖体系，为葡萄组培快速繁殖和大规模工厂化育苗体系提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
葡萄茎尖、茎段、叶柄、根尖4种外植体。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体处理
供试材料带回实验室后，将材料切成长3-5厘米的节段，用洗涤剂泡洗5分钟后，再用无菌水冲洗5-6次，转至超净工作台上用70%的消毒酒精消毒10秒，迅速倒出酒精，用无菌水清洗3-5次，滤干水分后用0.1%氯化汞消毒4分钟后再用无菌水清洗8-10次。用消过毒的剪刀剪段，除去两端伤口，长约在0.5-1.0厘米，将材料正插于培养基中，保持与培养基充分接触，每瓶插入3段。
1.2.2 筛选最适外植体
将已充分消毒灭菌后的葡萄茎尖、茎段、叶柄、根尖4种外植体接种于1/2MS + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.03mg/L + GA 0.2mg/L中，接种30天后统计4种外植体接种后产生愈伤组织效果。其中，90%的茎尖生成愈伤组织。实验对比可知，利用分裂生力较强的茎尖是葡萄组织培养的最适外植体。
1.2.3 筛选愈伤诱导最适培养基
以MS、1/2MS、B5、N6为基本培养基，分别加入6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L得到①、②、③、④4种培养基来进行诱导愈伤组织试验。琼脂浓度8.0g/L，蔗糖浓度2.5%，pH5.8。在4种培养基中接种茎尖培养得到的无菌苗外植体，观察统计愈伤组织的产生及其形成效果，筛选出最佳培养基。
由表1可知，葡萄茎尖外植体在②号培养基诱导愈伤组织的效果最好，愈伤组织呈深绿色、颗粒状、愈伤分化率最高，达97%，愈伤组织的生长速度也最快，因此1/2MS + 6-BA 2.0mg/L + IBA 1.5mg/L培养基较适合于葡萄茎尖诱导愈伤组织。
1.2.4 筛选茎叶分化最适佳培养基
以1/2MS为基本培养基，设计不同激素配比:⑤ 6-BA 0.5mg/L + IBA 0.5mg/L；⑥ 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.5mg/L；⑦ 6-BA 1.5mg/L + IBA 0.5mg/L；⑧ 6-BA 2.0mg/L + IBA 1.0mg/L来筛选茎叶分化最适佳培养基。
由表2可知，在⑥号培养基(即:1/2MS + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.5mg/L)上接种深绿色、颗粒状的愈伤组织后，能快速形成茎叶分化苗，分化率也最高，达97%，平均每块愈伤可形成4.7个茎叶分化苗，因此，用葡萄愈伤组织诱导茎叶分化苗的最适培养基是1/2MS + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.5mg/L。
1.2.5 筛选生根最适培养基
诱导不定根的培养基用1/2MS + IBA(0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mg/L)和1/2MS + NAA(0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mg/L)，每个处理5瓶，共15瓶。
由表3可知，1/2MS+IBA或NAA1.0mg/L是诱导葡萄茎叶分化苗生根的最适培养基。
1.2.6 培养条件
培养温度28℃，每天光照培养12小时，光照强度2000lx。接种30天后分别统计愈伤组织、茎段分化、不定根数量及生长效果。
1.2.7 练苗与移栽
当试管苗形成大量根系、有3-5片叶、高约3-8厘米时，将培养物移到室内自然光下锻炼2-3天，让其适应室内环境，再将组培苗瓶盖打开，在温室内练苗5-7天，当茎秆由黄白色变红、叶片油亮时，从培养瓶中取出小苗，用自来水洗掉根部黏着的培养基，移栽于沙床上，覆盖薄膜，湿度达80%左右。经过10天，叶片转绿增大，出现2-3片新叶，同时新长出白色侧根时即可移入营养钵或苗床栽植，30天后叶片逐渐增大、叶肉增厚，成活率达95%以上，枝蔓生长即可转入常规栽培管理。
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