植物组培培养基母液配制方法及注意事项

本文以配制MS培养基配方为例，讲解培养基各种母液的配制方法。母液主要分为：大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、铁盐母液、植物生长调节剂母液

一、材料与用具

1、药品与试剂

配制MS培养基母液所需的无机盐及有机物（见最后面的MS培养基配方表格）；植物生长调节剂（植物激素）：IAA、IBA、NAA、2，4-D、6-BA、KT；95%乙醇；1mol/L氢氧化钠，1mol/L盐酸；蒸馏水（或去离子水）。

2、仪器与用具

电子分析天平（感量0.001g）、普通天平（感量0.1g），烧杯（100mL、500mL、1000Ml），量筒（100mL），移液管（1mL、5mL、10mL）,容量瓶（250mL、500mL、1000mL），棕色广口瓶（100mL、500mL、1000mL），水浴锅、磁力搅拌器、冰箱、药勺、标签纸、铅笔等。

二、方法与步骤

1、大量元素母液的配制

将MS培养基配方中的各大量元素的化合物，按其所规定量的10倍分别在普通天平上称重，如下表

再分别用100mL烧杯加蒸馏水将其溶解，待充分溶解后将它们按顺序依次移入1000mL容量瓶中，并加蒸馏水定容至1000mL；此时混合液若出现白色沉淀则母液配制失败，若清澈透明则已配制成功。然后将已配制好的大量元素母液移入广口瓶中，并贴上标签（标记母液名称、浓缩倍数、配制日期及以后配制1L培养基时应移取的量）。最后将母液放入冰箱内保存备用。

三、注意点

1、大量元素母液的配制

(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO₄2－、Mg2+和H₂PO₄－等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca₂+、SO₄2－、Mg2+和H₂PO4－等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。

(2)CaCl₂·2H₂O要在最后单独加入，在溶解CaCl₂·2H₂O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO₂，以防沉淀。另外，CaCl₂·2H₂O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。

2、微量元素母液的配制

MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe ）组成。微量元素用量较少，特别是 CuSO₄·5H₂O、 CoCl₂·6H₂O ，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。电子分析天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ1ml。

注意：使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。

3、铁盐母液的配制

培养基常用的铁源是由硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）配制成的螯合态铁，其配制方法是：按配方所规定量的100倍，用电子天平称取2.78g硫酸亚铁和3.73g乙二胺四乙酸二钠，分别用蒸馏水将其溶解，可适当加热助溶，溶后将它们移入到1000ml的容量瓶中，并加蒸馏水定容至1000ml；然后将配制好的铁盐母液移入棕色广口瓶中，并贴上标签。当每配制1升MS培养基时移取铁盐母液10ml即可。

注意：在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA 鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。

4、有机物母液的配制

MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，定容至1L，注意称量时用电子分析天平。配制培养基时，每配1L培养基取此液10ml。

注意：

由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。

5、植物生长调节剂的母液配制

在植物组培快繁中一般常用的生长调节剂为：生长素和细胞分裂素类。常用的生长素类有2,4-D、NAA、IBA、IAA等；常用的细胞分裂素类有6-BA、KT、ZT等。母液一般制成0.1-1.0mg/mL。其配制方法（以NAA母液为例）：配制0.2mg/mL 1000mL的NAA母液，先用电子分析天平称取200mg的NAA，再用少量的95%乙醇溶解，溶后将其移入1000mL的容量瓶中，并加蒸馏水定容至1000mL，摇匀即成0.2mg/mL的NAA母液；然后将配制好的NAA母液移入棕色瓶中，并贴上标签；最后至于冰箱内保存备用。当配制培养基时若每升培养基需添加1mg的NAA时，则移取5mL的NAA母液即可。

注意：大部分的植物生长调节剂都是需要先用95%乙醇或1mol/L的氢氧化钠溶解，然后再加蒸馏水稀释定容至需要的浓度。由于植物生长调节剂用量较少，所以在配制母液时，可以根据生产实验要求减少配制量，如配制250mL即可。