阳丰甜柿组培技术实例含配方

康倍斯
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2022年2月28日13:47:36 评论 571

阳丰甜柿组培技术实例

阳丰甜柿多以君迁子(Diospyros lotus)为砧木进行嫁接繁育。但传统的嫁接方法培育时间较长,占地面积大,成本高。组织培养既可实现植物的离体快速繁殖,又能保持其优良性状,因此,利用植物组织培养实现阳丰甜柿的规模化生产有着重要意义。本试验以阳丰甜柿的带芽茎段为外植体,通过对其腋芽的诱导、增殖和生根,拟建立离体再生体系,为阳丰甜柿以后的工厂化育苗奠定基础。

1 材料

当年生半木质化 且腋芽饱满的阳丰甜柿茎段。

2 方法

2.1 外植体的处理

将采集的穗条去掉叶片,用洗洁精浸泡10分钟, 洗去表面灰尘和杂物等, 再用自来水冲洗1.5小时后,用刀片切成4-5cm长的带芽茎段,置于灭菌好的广口瓶中。在超净工作台 上用75%乙醇浸泡消毒处理30秒,无菌水冲洗4-5 次, 然后用含有0.1%氯化汞处理8分钟进行表面灭菌,浸泡过程中不时摇动,最后用无菌水冲洗5次,用无菌滤纸吸干茎段表面水分,用无菌刀片将其切成带单芽茎段。

2.2 初代培养

将上述单芽茎段接种至初代培养基1/2MS + ZT 1.0mg/L + IAA  0.1mg/L中进行腋芽萌发诱导,10天左右腋芽与木质部连接处的形成层细胞开始分裂,组织不断膨大,形成大量白色与浅绿色的愈伤组织;15天左右腋芽始萌发;之后愈伤组织开始慢慢变黑,新芽继续迅速生长,25天后新芽高度可达2.5cm。

2.3 继代增殖培养

将初代培养诱导的腋芽切下接种在继代增殖培养基1/2MS + IAA 0.1mg/L + ZT 1.0mg/L + 2ip 1.0mg/L中,培养30天左右,增殖系数4左右,苗生长健壮,长势好。

2.4 生根培养

切取生长健壮且长势一致、苗高3.0-4.0cm的无根苗接种在生根培养基1/2MS(硝酸钾和硝酸铵含量减半) + IBA 0.75mg/L中,进行暗培养7天后,转移至光下进行生根诱导,培养14天后开始有不定根形成,之后迅速生长,35天形成良好根系。

2.5 炼苗移栽

生根培养35天后,将生长状态良好、根系发达且株高3cm以上的试管苗进行炼苗,7天后将其从培养瓶中取出,洗净根部的琼脂,移栽至经消毒的混合基质(草炭土、蛭石、珍珠岩按体积比2:1:1)中,覆盖塑料薄膜保温保湿,湿度 60%~70%,20~30℃的大棚中培养。

2.6 培养基灭菌及培养条件

腋芽诱导及继代 增殖的培养基中均添加30g/L蔗糖,6g/L琼脂和0.5g/L PVP,生根培养基中添加15g/L蔗糖、6g/L琼脂 和0.5g/L PVP。高压灭菌前调整pH至5.8, 保持121℃高温灭菌20分钟。培养室温度(25±1℃)

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