鸾凤玉(Astrophytum myriostigma)和星球,即星兜(Astrophytum asterias)均为仙人掌科、星球属。其园艺价值较高,观赏价值同样较高,是植物园和多肉植物爱好者热衷收集的珍品。
本研究采用组织培养法,解决星球和鸾凤玉快速繁殖和种质保存问题。
1 材料与方法
1.1 外植体材料及培养条件
1.1.1 外植体选择
以星球和鸾凤玉实生苗的块茎为外植体。
1.1.2 外植体预处理及灭菌
将实生苗剪去根部,风干伤口,经流水冲洗1小时,1%新洁尔灭浸洗20分钟,无菌水冲洗3次,0.1%升汞溶液(加入0.05% 吐温-20)15分钟,无菌水再冲洗7-8次。
将消毒的材料置于无菌滤纸上,每个实生苗横切3刀,十字纵切2刀,即成外植体,这样可以保证每块外植体都具有髓部和表皮。
1.1.3 培养条件
启动培养基:MS + KT 1mg/L + 2,4-D 1mg/L
分化培养基:MS + 6-BA 1mg/L + KT 2mg/L
增殖培养基:MS + 6-BA 0.5mg/L + KT 0.5mg/L + NAA 0.1mg/L
复壮生根培养基:1/2MS + NAA 0.1mg/L
以上培养基均加蔗糖3% ,琼脂0.7%,pH值5.8。
培养温度为(25±2)℃,光照强度为2000lx,光照时长为8时/天。
2 结果与分析
2.1 启动诱导培养
将处理好的外植体接入启动培养基,5天后伤口截面膨大,形成一薄层黄绿色疏松的雪花状愈伤组织,增殖速度较快;20天后可见愈伤组织发生改变,从表皮形成绿色的愈伤组织,而从近髓部产生白色愈伤组织。
将形成的愈伤组织转于相同的培养基,可大量增殖,绿色愈伤组织可以分化为绿色和白色两种愈伤组织,而白色愈伤组织只能形成大量单一的白色愈伤组织。
2.2 芽分化培养
将绿色愈伤组织转入分化培养基中,愈伤组织继续生长,20天后绿色愈伤组织上形成许多浓绿色小点,继而形成绿色球状小体(GCB),再经过10天后能形成大量典型的子球。
2.3 继代增殖培养
将上述分化出的小球转入增殖培养基。大约10天后每个小球的刺座都有子球产生,30天后形成一团群生的子球。
将每个小球分开作继代培养后,增殖速度较快,小球基部有极少愈伤组织形成,同时大约50%的小球有10-15条很细的须根生成,且有壮苗效果。
继代时间以30天左右一次较好,此时小球的增殖系数可达到6-8倍,这样得到的小球生长情况良好,部分生根的丛生球可直接出瓶。
2.4 复壮生根培养
在增殖培养基上得到的子球很多未生根。将这些未生根的小球进行适当的分离后转入生根培养基中进行培养。1个月左右,可使小球生根并长得较大。
在转入生根培养基后,需要增大光照强度到3000lx,最好使用散射阳光,生根率90%以上,部分生根的小球产生类似实生苗样的粗大直根。
2.5 炼苗移栽
采用蛭石:珍珠岩:草木灰=3:2:1的混合基质,经高压灭菌后装入苗钵,距顶端大约5厘米。
将开口炼苗2天的出瓶苗取出均匀植入基质中,适当保湿。用低浓度的多菌灵溶液浇灌,散射光照射。
3周后可见小球生长,成活率大于95%,定植2个月后每株苗可以产生很多根系,生长速度较快。
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