水晶掌 ( Haworthia cymbiformis),属百合科,十二卷属,原产西南非洲,为引种的典型多年生常绿多肉植物。
本文从材料的选取,愈伤组织诱导、增殖、分化,根的诱导和炼苗等方面对水晶掌的组织培养进行了深入的研究, 旨为大规模快速生产水晶掌组培苗提供理论和实践依据。
1 材料与方法
1.1 材料
以水晶掌的叶片为外植体。
1.2 方法
1.2.1 取材与消毒
将材料放入烧杯中用自来水冲洗干净,先用适量的洗衣粉清洗,倒去洗涤剂,然后在自来水下冲洗30分钟以上。
再在超净工作台上用75%的酒精浸泡30秒,用无菌水冲洗2-3次后,迅速倒入0.1% HgCl2(氯化汞)液中浸泡8-10分钟,倾去HgCl2液再用无菌水冲洗4-5次,剥取叶片,将材料切成1厘米左右的小段,用滤纸吸干水后备用。
1.2.2 培养条件
培养温度在 (25±2)℃的恒温条件下,光照条件一般是2000lx,光照每日12-16小时。
1.2.3 愈伤组织诱导培养
在无菌条件下,将经过消毒处理,切成1厘米左右的备用材料接种到诱导培养基(配方见文章底部,下同)。
1.2.4 愈伤组织增殖培养
外植体培养60天后形成大量的愈伤组织且出现分化现象,在无菌条件下,将愈伤组织从培养瓶中取出,用无菌水冲洗数次至愈伤组织块上无培养基残留,将愈伤组织切成小块,接种到增殖培养基中进行培养。
1.2.5 愈伤组织分化培养
将水晶掌愈伤组织,在无菌条件下转入分化培养基。
1.2.6 诱导生根培养
待叶片长至1-1.5厘米左右时,将幼苗取出,在无菌条件下接种到生根培养基中继续培养。
生根培养基采用1/2 MS基本培养基,即矿物质元素含量减半,其他的成分不变。
1.2.7 炼苗与移栽
炼苗: 当生根后或根系得到基本发育后(30天左右),将培养瓶移到室外进行闭瓶炼苗7-10天左右,遮荫度为50% -70%。
然后,在自然光下进行开瓶炼苗2-3天。开瓶炼苗可以分阶段进行,即首先松盖1-2天,然后部分开盖1-2天,最后完全揭盖。
移栽假植:组培苗从琼脂培养基中移出时用长的镊子小心取出,彻底清洗干净根部,并且避免损坏根系。
之后,使用质量分数为0.1%-0.3%的高锰酸钾杀菌剂溶液清洗,再用清水清洗后移入苗床。
假植的材料选用了蛭石,将假植材料填满2/3,浇透水(添加适量的营养液),再将已洗去根部培养基的组培苗小心植入,保持根部舒展向下,然后复埋,稍压实。
采用喷雾洒水保持一定的湿度,温度保持在20℃左右,室内种植。
2 讨论
百合科十二卷属植物的种子一般是不易得到的,或者他们的发芽率很低,传统的繁殖方法大多有分株、叶插,不易成活且生长缓慢,采用组织培养方法是解决十二卷属植物繁殖与普及的途径之一。
目前百合科十二卷属植物组织培养和快速繁殖已有过报道的主要有厚叶莲花掌、条纹十二卷、截形十二卷、康平寿、克里克特寿、西山寿的花茎的组织培养和快速繁殖。点纹十二卷采用侧芽为外植体诱导丛生芽到再生植株。
本文以水晶掌叶片为外植体做了较系统的实验 ,建立了较为简便可行的快繁体系,可为生产提供参考,也为十二卷属百合科中的其他多肉植物引种和种质保存、快速繁殖与开发利用提供一定的理论依据。
附配方:
诱导培养基:MS + BA 3.0 mg/L + NAA 0.3 mg/L
增殖培养基:MS + BA 4.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L
分化培养基:MS + BA 3.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L
生根培养基:1/2MS + IBA 1.0 mg/L
以上培养基均含3%蔗糖和0.7%琼脂,pH5.8-6.2
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