微型月季组培技术实例含配方

微型月季(Rosa hybrida)是月季家族的新品种，为蔷薇科蔷薇属多年生木本，落叶或半落叶常绿灌木。

本文以黄色新品种微型月季为研究对象，探讨不同外植体对愈伤组织诱导的影响，以及不同配比的植物生长调节剂对愈伤组织诱导、不定芽诱导和生根的影响，建立了高频离体再生体系。

1材料与方法

1.1 外植体材料及培养条件

1.1.1 外植体选择

本文采用微型月季黄色品种，选择生长健壮、无病虫害的植株作为试材，采取其12天叶龄的叶片作为外植体。

1.1.2 材料预处理及消毒

将微型月季枝条在自来水下冲洗干净，用75%乙醇表面消毒30-40秒，再用0.1%升汞溶液灭菌2-6分钟，无菌水冲洗3-5次。在无菌条件下将叶片剪成0.5厘米平方的小块，并露出新鲜伤口。

1.1.3 培养条件

培养温度(25±2)℃，光照时间16小时/天，光照强度2000-3000lx。

2 结果与分析

2.1 初代诱导培养

选取经处理的外植体接种于诱导愈伤组织培养基上。培养30天，在显微镜下可观察到所诱导出的愈伤组织颜色偏浅黄且比较透亮，呈圆颗粒状，质地饱满。可将该种类型的愈伤组织转移到分化培养基中进行不定芽的诱导。

2.2 继代增殖培养

外植体在愈伤组织诱导培养基上培养30天后，挑选长势良好的愈伤组织，接种于不定芽的诱导和增殖培养基中进行不定芽诱导，愈伤组织表面出现绿色芽点，继续培养4-6周后可形成不定芽，诱导率可达92.6%。

2.3 生根培养

将高1-2厘米且长势良好的再生苗移植到生根培养基上诱导生根，幼苗经过15天的培养便能长出根，生根率为100%。另外，活性炭对培养基中有害物质具有吸附作用。因此，在诱导生根的过程中加入少量活性炭有利于根的生长。

附配方：

诱导培养基：MS + 6-BA1.0mg/L + 2，4-D3.0mg/L

增殖培养基：MS + 6-BA1.0mg/L + NAA0.1mg/L + TDZ0.02mg/L

生根培养基：1/4MS + NAA0.1mg/L