从组培的概念可以看出，无菌是组培的核心前提，我们从一开始的组培室布局设计到出苗前的绝大部分准备工作都围绕无菌展开的。
然而，菌类污染问题依然是组培在研究和生产中困扰人们的三大难题之一。
究其原因，主要是因为组培过程中菌类来源途径非常多，有培养容器、培养基本身、外植体、无菌室环境、接种及转瓶的器械以及操作者本人等。
所以在组培过程中，我们要创造并保持一个良好的无菌环境，要严格按照无菌操作程序，严格灭菌，防止污染。
本站在相关文章中有介绍各个菌类来源的灭菌方法和程序，本文主要介绍无菌室环境的灭菌方法。
无菌室包括无菌操作室（即接种室）和无菌培养室。由于组培的大部分无菌行为都在接种室进行，所以无菌室一般泛指接种室。
一般接种室的设计要求地面平坦，墙壁光滑，这样以便于彻底清洗和消毒灭菌，有利于长时间保持无菌状态，方便无菌操作。同时在进出口应安装滑门，减少开关门时空气扰动。室内应尽可能少放设备和器械。
完成这些设计要求后，接下来就应该对接种室进行灭菌处理了，一般来说，接种室灭菌分为定期灭菌和日常灭菌两种方式。
定期灭菌
在第一次启用接种室时，应统一进行一次甲醛和高锰酸钾熏蒸灭菌处理，以后建议每半年进行一次，如果杂菌感染严重的情况，应及时进行灭菌消毒一次。
甲醛和高锰酸钾熏蒸具体操作如下：
1. 密闭接种室的门窗，为了增强熏蒸效果，可以进行预湿处理。
2. 量取适量的甲醛溶液和高锰酸钾。按照40%甲醛10毫升/立方米、高锰酸钾5克/立方米计算用量。不同情况下，用量有所不同，但比例为2:1。
3. 将温水倒入玻璃或陶瓷容器内，加入高锰酸钾，搅拌均匀；再加入甲醛；容器要稍微大一点，以防止甲醛和高锰酸钾反应溢出。
4. 加入甲醛后人立即离开，密闭房间；容器放置位置应尽量靠近门，以便操作人员迅速撤离。
5. 密闭熏蒸4小时以上，启动过滤型排气扇排除甲醛气体，如果没有安装排气扇，可开门通气，通气至少48小时以上方可投入使用。
接种室日常灭菌
1 药剂喷洒
每次接种前用70%酒精或0.2%的苯扎溴铵溶液喷洒接种室空间和四周，要求喷洒均匀、全面。
2 紫外线照射
在接种室室内上方及门口安装紫外灯。每次接种前进行紫外灯照射20-30分钟，照射前先进行药剂喷洒，以便灰尘菌类沉降到下方。
3 臭氧灭菌
建议每周进行一次，一台移动式的臭氧发生器即可满足。
培养室的首次灭菌方法与接种室相同，培养架在第一投入使用时，用0.2%的苯扎溴氨溶液擦拭，以后可以在瓶苗搬空的时候进行擦拭。
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